正確清洗凝膠濾膜是保障實驗數據可靠性的必要措施

更新時間：2025-08-25

瀏覽次數：191

　　凝膠濾膜作為尺寸排阻色譜（SEC）或脫鹽純化中的核心分離介質，其性能直接影響實驗結果的準確性與重復性。隨著使用次數增加，膜表面及孔道內易吸附蛋白質、脂類或顆粒雜質，導致通量下降、分離效率降低。因此，掌握正確的清洗方法，不僅是延長凝膠濾膜壽命的關鍵，更是保障實驗數據可靠性的必要措施。

　　一、清洗原則：溫和有效，防止損傷

　　凝膠濾膜多由交聯葡聚糖、瓊脂糖等親水性高分子材料制成，結構脆弱，不耐高壓、強酸、強堿或有機溶劑。清洗應遵循“低壓力、適pH、防脫水”的原則，避免破壞其三維多孔網絡結構。

　　二、常規清洗步驟

　　沖洗殘留物

　　實驗結束后，立即用至少5-10倍柱體積的去離子水或初始緩沖液沖洗系統，去除未結合的樣品和鹽分，防止沉淀堵塞孔道。

　　去除弱吸附物

　　使用0.1–0.5mol/LNaCl溶液沖洗，可有效清除因離子相互作用產生的非特異性吸附雜質，適用于大多數情況。

　　深度清洗（去蛋白）

　　對于蛋白質殘留嚴重的情況，推薦使用含0.5–1mol/LNaOH的溶液進行清洗。堿性條件可水解并去除大多數有機污染物。注意：瓊脂糖基濾膜可耐受0.5–1MNaOH（清洗時間≤30分鐘），而葡聚糖基材料則不耐強堿，應避免使用。

　　去除脂類或疏水性雜質

　　可采用30%–70%的乙醇或異丙醇短時沖洗（≤1小時），但需注意有機溶劑可能導致部分凝膠收縮，沖洗后應充分用水平衡。

　　三、特殊清洗方案

　　變性劑清洗：對于頑固蛋白聚集體，可用6M尿素或4M鹽酸胍溶液沖洗，隨后逐步降低濃度平衡。

　　去垢劑輔助：添加0.1%–0.5%非離子型去垢劑（如TritonX-100或Tween-20）可增強脂蛋白去除效果，但需沖洗避免殘留干擾后續實驗。

　　四、保存與防干涸

　　清洗完成后，應將濾膜保存在20%乙醇或0.02%的緩沖液中，防止微生物滋生。切忌干燥保存，干涸會導致孔結構塌陷。

　　五、驗證清洗效果

　　定期檢測純水通量（PWP）和標準蛋白的分離效率，判斷膜性能是否恢復。